Plásmido Doble Nickase (h) PLUNC: sc-416774-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PLUNC consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PLUNC (h) y el plásmido de doble nickasa PLUNC (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BPIFA1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PLUNC Anticuerpo (A-11): sc-271457
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PLUNC | sc-416774-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PLUNC | sc-416774-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BPIFA1 codifica la proteína humana PLUNC, un miembro secretado de la familia de proteínas con pliegue tipo BPI, enriquecido en el epitelio de las vías aéreas superiores y la nasofaringe. PLUNC contribuye a la defensa mucosal innata al modular la homeostasis del líquido de la superficie de las vías respiratorias, influir en la función de barrera epitelial e interactuar con componentes microbianos que modelan la señalización inflamatoria local. La expresión de BPIFA1 responde a la diferenciación epitelial y a señales inflamatorias, vinculándola con procesos como las interacciones huésped–patógeno, el aclaramiento mucociliar y la regulación del microambiente de las vías respiratorias. Se ha informado de una abundancia alterada de BPIFA1/PLUNC en contextos de inflamación respiratoria y con frecuencia se estudia en relación con los mecanismos de enfermedad crónica de las vías respiratorias y la remodelación epitelial.
PLUNC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BPIFA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BPIFA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BPIFA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BPIFA1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.