Plasmide CRISPR/Cas9 KO PLEKHA5 (h): sc-408239

Présentation

PLEKHA5 code une protéine adaptatrice contenant un domaine d’homologie à la pleckstrine, associée à la signalisation proche de la membrane et à l’organisation du cytosquelette, et contribuant au contrôle spatial de complexes protéiques dans les cellules polarisées. En couplant des domaines membranaires riches en phosphoinositides à des facteurs régulateurs, PLEKHA5 a été impliquée dans des processus tels que le trafic vésiculaire, la morphologie cellulaire et la modulation, dépendante du contexte, des signalisations prolifératives. Des altérations de l’expression ou de la régulation de PLEKHA5 ont été rapportées dans des études de génomique du cancer et d’expression génique, ce qui concorde avec des rôles dans le contrôle du cycle cellulaire et des phénotypes migratoires. Ces caractéristiques font de PLEKHA5 une cible utile pour disséquer des nœuds de signalisation dépendants de la membrane qui influencent la croissance et le comportement cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PLEKHA5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLEKHA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLEKHA5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLEKHA5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PLEKHA5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLEKHA5 pour l'étude de la signalisation de PLEKHA5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLEKHA5 essentiels à la fonction de PLEKHA5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLEKHA5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PLEKHA5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PLEKHA5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLEKHA5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PLEKHA5 plasmide HDR (h) et le PLEKHA5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLEKHA5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLEKHA5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.