PLAC1 Double Nickase Plasmid (m): sc-425008-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PLAC1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PLAC1 Double-Nickase-Plasmid (m) und PLAC1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Plac1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PLAC1: sc-365919
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PLAC1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425008-NIC | 20 µg | $410.00 |
Plac1 kodiert PLAC1, ein in der Plazenta angereichertes, membranassoziiertes Protein, das bei der Maus mit der Differenzierung von Trophoblasten, der Morphogenese der Plazenta und der Regulation der Biologie an der fetomaternalen Grenzfläche in Verbindung gebracht wird. Die PLAC1-Expression ist mit Prozessen wie Zelladhäsion, Migration und der Ausbildung einer epithelialähnlichen Barriere verknüpft, die die normale Plazentaentwicklung und den Nährstoffaustausch unterstützen. Eine dysregulierte PLAC1-Expression wurde mit abnormem Plazentawachstum und reproduktiven Phänotypen assoziiert, wodurch Plac1 ein nützlicher Genort ist, um Gen-Netzwerke zu analysieren, die die extraembryonale Entwicklung und endokrine Signalgebung steuern. Darüber hinaus wird PLAC1 in der Krebsbiologie häufig als onkofetales Antigen untersucht und unterstützt mechanistische Forschung zur entwicklungsbezogenen Reprogrammierung und zu tumorassoziierten Genexpressionsprogrammen, ohne damit einen klinischen Nutzen zu implizieren.
PLAC1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Plac1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Plac1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Plac1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Plac1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.