Plasmide CRISPR/Cas9 KO PKLR (m): sc-422273

Présentation

Le gène murin **Pklr** code la pyruvate kinase hépatique et érythrocytaire (PKLR), une enzyme de la glycolyse qui catalyse la conversion du phosphoénolpyruvate en pyruvate, avec production concomitante d’ATP. L’activité de PKLR contribue à contrôler le flux glycolytique, la disponibilité du pyruvate pour le métabolisme mitochondrial et l’équilibre énergétique cellulaire, avec une importance particulière dans les cellules érythroïdes où la glycolyse constitue une source dominante d’ATP. La régulation de PKLR s’articule avec des programmes de détection des nutriments et de régulation transcriptionnelle qui façonnent le métabolisme des glucides, notamment des voies sensibles à l’insuline et des voies d’adaptation à l’hypoxie. Une altération de la fonction de PKLR est associée à des dysfonctions métaboliques des globules rouges et à des phénotypes d’anémie associés, faisant de **Pklr** un point d’étude utile pour analyser les réponses au stress métabolique et la physiologie des érythrocytes dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PKLR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pklr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pklr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pklr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PKLR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pklr pour l'étude de la signalisation de PKLR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pklr essentiels à la fonction de PKLR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pklr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PKLR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PKLR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pklr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PKLR plasmide HDR (m) et le PKLR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pklr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pklr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.