Plásmido CRISPR de Activación (h) PKC nu: sc-403822-ACT

PRKD3 codifica la proteína quinasa D3 (PKC nu), una quinasa de serina/treonina que actúa aguas abajo de la señalización de PKC dependiente de diacilglicerol para regular redes de fosforilación que controlan la proliferación, la supervivencia, la migración celular y el tráfico vesicular. PKC nu participa en la integración de señales procedentes de GPCR y de receptores tirosina quinasa, y contribuye a respuestas transcripcionales vinculadas a MAPK/ERK y NF-κB, con funciones adicionales en la remodelación del citoesqueleto y el transporte del Golgi a la membrana plasmática. La actividad alterada de PRKD3 se ha asociado con una señalización desregulada de factores de crecimiento y con fenotipos invasivos en múltiples contextos de cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para investigar la reconfiguración de vías oncogénicas. En modelos celulares humanos, la perturbación de PRKD3 se utiliza comúnmente para estudiar el control, mediado por quinasas, de las respuestas al estrés, los programas de motilidad y la regulación transcripcional.

PKC nu El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRKD3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PKC nu El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRKD3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRKD3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PKC nu. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRKD3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PKC nu en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PKC nu en células tumorales con expresión de PRKD3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.