Plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC lambda/iota (m): sc-422263

Présentation

Prkci code pour l’isoforme atypique de la protéine kinase C, PKC lambda/iota, une kinase sérine/thréonine qui agit en aval de complexes de polarité tels que PAR3–PAR6 et contribue à l’établissement de la polarité apico‑basale, à l’organisation des jonctions serrées et à la division cellulaire asymétrique. PKC lambda/iota intègre des signaux issus de voies régulées par PI3K et par de petites GTPases afin de coordonner le remodelage du cytosquelette, le trafic vésiculaire et la morphogenèse épithéliale. Dans des modèles murins, une activité altérée de Prkci a été associée à une désorganisation de l’architecture tissulaire et à des programmes développementaux et immunitaires aberrants, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’intégrité épithéliale, de la différenciation et de la signalisation en réponse au stress. Son rôle central dans les voies de contrôle de la polarité et de la croissance relie également la dérégulation de Prkci à des mécanismes fréquemment explorés en biologie du cancer et en recherche métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC lambda/iota (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prkci dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prkci, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prkci à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PKC lambda/iota.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prkci pour l'étude de la signalisation de PKC lambda/iota, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prkci essentiels à la fonction de PKC lambda/iota
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prkci pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PKC lambda/iota plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PKC lambda/iota plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prkci. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PKC lambda/iota plasmide HDR (m) et le PKC lambda/iota (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prkci pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prkci définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.