Plásmido Doble Nickase (h) PIWIL1: sc-418611-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PIWIL1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PIWIL1 (h) y el plásmido de doble nickasa PIWIL1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PIWIL1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PIWIL1 | sc-418611-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PIWIL1 | sc-418611-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIWIL1 (HIWI) es una proteína Argonauta de la subfamilia PIWI que se une a piRNAs para regular el silenciamiento génico postranscripcional, la represión de transposones y el control epigenético de la estabilidad del genoma, en particular en programas asociados a la línea germinal. A través de interacciones con la maquinaria de biogénesis de piRNAs y con factores asociados a la cromatina, PIWIL1 contribuye a la regulación guiada por ARN de elementos repetitivos y de dianas de ARNm, influyendo en decisiones de destino celular y en la diferenciación. Se ha informado de una expresión desregulada de PIWIL1 en múltiples tipos de cáncer y se estudia en el contexto de la proliferación de células tumorales, fenotipos tipo célula madre y redes reguladoras de pequeños ARN alteradas. Estas funciones hacen de PIWIL1 una diana útil para investigar la biología de la vía de los piRNAs, el mantenimiento de la integridad del genoma y los mecanismos reguladores mediados por ARN en células humanas.
PIWIL1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PIWIL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PIWIL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PIWIL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PIWIL1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.