Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pitx1: sc-402911-ACT

PITX1 code le facteur de transcription humain de type « paired-like » à domaine homéobox Pitx1, un régulateur nucléaire qui se lie à l’ADN pour coordonner des programmes géniques contrôlant la spécification du destin cellulaire, la différenciation et la mise en place des tissus. Pitx1 participe à des réseaux transcriptionnels qui façonnent les processus du développement et maintiennent l’identité de lignée en modulant l’activité des promoteurs et des enhancers. Une expression altérée de PITX1 ou des perturbations de sa régulation ont été associées à une dérégulation du contrôle de la croissance et à des changements de l’état de différenciation dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la reconfiguration des réseaux transcriptionnels. Comme Pitx1 influence de larges profils d’expression génique, il est fréquemment étudié dans des analyses de voies reliant des facteurs de transcription du développement à des programmes de prolifération, de migration et d’identité cellulaire.

Pitx1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PITX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pitx1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PITX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PITX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pitx1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PITX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pitx1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pitx1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PITX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.