PITSLRE B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402477-ACT

CDK11A kodiert die PITSLRE‑B‑Cyclin-abhängige Kinase, eine Serin/Threonin-Kinase, die an der Koordination des Zellzyklusfortschritts mit der RNA‑Prozessierung und der transkriptionellen Kontrolle beteiligt ist. PITSLRE B wurde mit der Regulation des Prä‑mRNA‑Spleißens, mitotischen Ereignissen und stressresponsiver Signalübertragung in Verbindung gebracht, was mit Rollen bei der Aufrechterhaltung der proliferativen Homöostase übereinstimmt. Als Regulator der CDK‑Familie kann eine veränderte CDK11A‑Aktivität Signalwege beeinflussen, die Checkpoint‑Kontrolle, Apoptose und Genexpressionsprogramme steuern, welche in Krebs und anderen proliferativen Erkrankungen häufig fehlreguliert sind. Diese Eigenschaften machen CDK11A/PITSLRE B zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen der Zellteilung, die Kopplung von Transkription und Spleißen sowie kontextabhängige Viabilitätsphänotypen in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

PITSLRE B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDK11A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PITSLRE B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDK11A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDK11A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PITSLRE B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDK11A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PITSLRE B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PITSLRE B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDK11A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.