Plasmide Double Nickase (m) PiT1: sc-422988-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) PiT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PiT1 Double Nickase (m) et le plasmide PiT1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc20a1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) PiT1 | sc-422988-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc20a1 chez la souris code le transporteur de phosphate dépendant du sodium de type III PiT1, une protéine membranaire largement exprimée qui assure l’absorption du phosphate inorganique afin de soutenir la synthèse des nucléotides, le métabolisme des phospholipides et la bioénergétique cellulaire. PiT1 met en relation la disponibilité en phosphate avec la progression du cycle cellulaire et les voies de signalisation de survie, et a été associé au contrôle de la prolifération et aux réponses au stress dans de nombreux types cellulaires. Au-delà de l’homéostasie du phosphate, PiT1 contribue à des processus liés à la minéralisation et à des réseaux de signalisation induits par le phosphate, à l’interface avec des voies métaboliques et développementales. La dérégulation du transport du phosphate et des voies associées à PiT1 est pertinente pour l’étude de la biologie de la calcification, du remodelage métabolique et des phénotypes prolifératifs dans des systèmes modèles pertinents pour les maladies.
PiT1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc20a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc20a1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc20a1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc20a1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.