Partículas Lentivirales de Activación (h) Pit-1: sc-401671-LAC

POU1F1 codifica Pit-1, un factor de transcripción con dominio POU-homeodominio específico de la hipófisis, necesario para la especificación de linajes de la adenohipófisis y la expresión de genes hormonales. Pit-1 integra programas transcripcionales del desarrollo y endocrinos al unirse a elementos reguladores en cis para controlar genes implicados en la diferenciación de somatotropos, lactotropos y tirotropos, incluidas las redes reguladoras de la hormona del crecimiento, la prolactina y la TSHβ. La alteración o la desregulación de POU1F1 se asocia con defectos del desarrollo hipofisario y con fenotipos de deficiencia combinada de hormonas hipofisarias, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar el control transcripcional de la identidad endocrina. La actividad de Pit-1 humano también se utiliza como modelo para cartografiar la lógica de los potenciadores (enhancers), la ocupación de la cromatina y las interacciones cooperativas con cofactores que configuran el circuito regulador de genes hipofisarios.

Las partículas de activación lentiviral Pit-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de POU1F1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Pit-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción POU1F1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Pit-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo POU1F1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.