Pit-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401671-LAC

POU1F1 kodiert Pit-1, einen hypophysenspezifischen POU-Homeodomänen-Transkriptionsfaktor, der für die Festlegung der Zelllinien der Adenohypophyse und die Expression von Hormon-Genen erforderlich ist. Pit-1 verknüpft entwicklungsbiologische und endokrine Transkriptionsprogramme, indem es an cis-regulatorische Elemente bindet und so Gene steuert, die an der Differenzierung von Somatotrophen, Laktotrophen und Thyreotrophen beteiligt sind, einschließlich der regulatorischen Netzwerke für Wachstumshormon, Prolaktin und TSHβ. Störungen oder eine veränderte Regulation von POU1F1 werden mit Entwicklungsdefekten der Hypophyse und Phänotypen einer kombinierten Hypophysenhormoninsuffizienz in Verbindung gebracht, was es zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle endokriner Identität macht. Die Aktivität von humanem Pit-1 dient zudem als Modell zur Kartierung von Enhancer-Logik, Chromatinbelegung und kooperativen Interaktionen mit Kofaktoren, die die genregulatorischen Schaltkreise der Hypophyse prägen.

Pit-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente POU1F1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Pit-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der POU1F1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Pit-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen POU1F1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.