Pilt Double Nickase Plasmid (h): sc-413980-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Pilt Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Pilt Double-Nickase-Plasmid (h) und Pilt Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TJAP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Pilt Double Nickase Plasmid (h) | sc-413980-NIC | 20 µg | $410.00 |
TJAP1 kodiert das menschliche Protein Pilt, einen bislang nur unzureichend charakterisierten Faktor, dem aufgrund vorhergesagter Interaktionen mit zytoskelettalen und membranassoziierten Komplexen eine Rolle bei der Organisation von Zellkontakten und der epithelialen Polarität zugeschrieben wird. Zunehmende Annotationen bringen TJAP1 mit Prozessen in Verbindung, die für die Dynamik der Zell-Zell-Adhäsion, die Barrierefunktion und die räumliche Kontrolle von Signalwegen relevant sind und eine koordinierte Vesikeltraffik sowie Aktin-Remodellierung erfordern. Eine Fehlregulation der Junction-Architektur und von Polaritätsprogrammen ist häufig mit veränderter Proliferation, Migration und Stressantworten assoziiert, wodurch TJAP1 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in Modellen der Gewebehomöostase darstellt. Die Untersuchung der Pilt-Funktion kann dazu beitragen zu klären, wie Junction-gekoppelte Netzwerke mit Signalwegen verzahnt sind, die Differenzierung und kontextabhängige Signalübertragung in humanen Zellen steuern.
Pilt Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TJAP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TJAP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TJAP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TJAP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.