Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PIKE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405344
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PIKE El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PIKE, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PIKE Anticuerpo (G-9): sc-166864
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PIKE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405344 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
AGAP2 codifica PIKE, una GTPasa multidominio y adaptador de señalización que acopla las señales de receptores de factores de crecimiento a la vía de la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K), influyendo así en rutas dependientes de PIP3 que regulan la proliferación, la supervivencia y la dinámica del citoesqueleto. PIKE interactúa con componentes de las cascadas de receptores tirosina cinasa y modula efectores aguas abajo como AKT, afectando la endocitosis, el tráfico vesicular y la remodelación de actina en múltiples tipos celulares. La actividad desregulada de AGAP2/PIKE se ha vinculado con alteraciones de la señalización oncogénica, respuestas al estrés metabólico y fenotipos invasivos mediante la perturbación de la conectividad de redes centradas en PI3K. Estas propiedades hacen de AGAP2 un nodo útil para analizar la integración de señales y el control por retroalimentación dentro de las vías de crecimiento y supervivencia en modelos celulares humanos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PIKE (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AGAP2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AGAP2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AGAP2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PIKE.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AGAP2 para la investigación de la señalización de PIKE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de AGAP2 críticos para la función de PIKE
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AGAP2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PIKE CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PIKE CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AGAP2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PIKE (h) y el plásmido HDR PIKE (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AGAP2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AGAP2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.