Particules Lentivirales d'Activation (h) PIEZO2: sc-412957-LAC

PIEZO2 code un canal cationique non sélectif activé mécaniquement, qui convertit la tension membranaire en un influx rapide de Ca2+, façonnant la mécanotransduction dans les neurones sensoriels et d’autres types cellulaires mécanorécepteurs. L’activité de PIEZO2 couple des stimuli physiques à une signalisation en aval dépendante du calcium, influençant l’excitabilité neuronale, le remodelage du cytosquelette et des réponses transcriptionnelles liées aux voies du toucher et de la proprioception. Les variations génétiques ou une dérégulation de la fonction de PIEZO2 ont été associées à une altération du traitement somatosensoriel et à des phénotypes neuromusculaires, ce qui en fait une cible largement étudiée en biologie sensorielle et en mécanobiologie. In vitro, PIEZO2 est couramment étudié dans des modèles de courants induits mécaniquement, de dynamique de signalisation calcique et de programmes d’expression génique mécanodépendants.

Les particules d'activation lentivirales PIEZO2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PIEZO2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PIEZO2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PIEZO2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PIEZO2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PIEZO2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.