Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PIASy Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403125
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PIASy El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PIASy, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PIASy Anticuerpo (C-11): sc-166706
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PIASy Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403125 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PIAS4 codifica PIASy, una ligasa E3 de SUMO que modula la SUMOilación de proteínas para ajustar con precisión programas transcripcionales, respuestas al daño del ADN y la señalización de la inmunidad innata. PIASy regula la actividad, la localización y la estabilidad de diversos factores de transcripción e intermediarios de señalización, conectando el control dependiente de SUMO con vías como NF-κB, las respuestas al interferón y redes activadas por estrés. A través de estos mecanismos, PIASy influye en la progresión del ciclo celular, la apoptosis y procesos asociados a la cromatina que con frecuencia se ven alterados en la biología de las enfermedades. La función alterada de PIAS4/PIASy se ha estudiado en el contexto de la señalización oncogénica, la regulación inflamatoria y fenotipos de mantenimiento del genoma relevantes para la tumorigenesis y modelos de transformación celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PIASy (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PIAS4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PIAS4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PIAS4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PIASy.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PIAS4 para la investigación de la señalización de PIASy, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PIAS4 críticos para la función de PIASy
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PIAS4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PIASy CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PIASy CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PIAS4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PIASy (h) y el plásmido HDR PIASy (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PIAS4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PIAS4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.