Plasmide CRISPR d'Activation (h) PIAS 3: sc-401406-ACT

PIAS3 (inhibiteur protéique de STAT3 activé) est une ligase E3 de SUMO qui module les réponses transcriptionnelles en favorisant la SUMOylation de protéines nucléaires et en inhibant directement l’activité de liaison à l’ADN de STAT3. En régulant la signalisation JAK/STAT et, plus largement, le contrôle SUMO-dépendant de l’activité des facteurs de transcription, PIAS3 influence les sorties de signalisation des cytokines, la progression du cycle cellulaire et les programmes géniques sensibles au stress. PIAS3 a été associé à des voies impliquées dans la régulation immunitaire et la signalisation oncogénique, où l’on observe fréquemment une activité STAT3 altérée ainsi que des dynamiques de SUMOylation perturbées. L’étude de la fonction de PIAS3 aide à clarifier comment les modifications post-traductionnelles et la répression transcriptionnelle façonnent les états d’expression génique dans des contextes liés à l’inflammation et à la prolifération.

PIAS 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PIAS 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PIAS 3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PIAS 3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PIAS 3 dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.