Plasmide Double Nickase (h) PIAS 1: sc-402407-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PIAS 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PIAS 1 Double Nickase (h) et le plasmide PIAS 1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PIAS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PIAS 1 Antibody (F-1): sc-365127
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PIAS 1 | sc-402407-NIC | 20 µg | $410.00 |
PIAS1 code l’inhibiteur protéique de STAT1 activé (PIAS1), une ligase E3 de SUMO qui module l’activité des facteurs de transcription et la signalisation associée à la chromatine. PIAS1 régule les réponses aux cytokines et aux interférons en atténuant la transcription dépendante de STAT1 et interagit également avec les voies NF‑κB, p53 et de réponse aux dommages de l’ADN via un contrôle dépendant de la SUMOylation de la stabilité des protéines, de leur localisation et de leur occupation des promoteurs. Par ces fonctions, PIAS1 influence la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et les programmes géniques inflammatoires, et une activité altérée de PIAS1 a été associée à une dérégulation de la signalisation immunitaire et à des états transcriptionnels liés aux tumeurs. Son rôle, à l’interface entre modification post‑traductionnelle et contrôle transcriptionnel, fait de PIAS1 une cible utile pour des études mécanistiques du couplage entre signalisation et expression génique.
PIAS 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PIAS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PIAS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PIAS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PIAS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.