Plásmido Doble Nickase (h) PI 3-kinase p85β: sc-401991-NIC

PIK3R2 codifica la subunidad reguladora p85β de la fosfoinosítido 3-quinasa (PI3K) de clase IA, que estabiliza y modula las isoformas catalíticas p110 y acopla las tirosina quinasas receptoras activadas y las proteínas adaptadoras con la señalización downstream PI3K–AKT–mTOR. Mediante el control de la generación de PIP3, la PI3-quinasa p85β influye en el crecimiento, la supervivencia y el metabolismo celulares, así como en la dinámica del citoesqueleto y el tráfico vesicular, integrando señales de las vías de insulina/IGF y de factores de crecimiento. La regulación alterada de la vía PI3K está ampliamente implicada en la señalización oncogénica, la desregulación metabólica y la función de las células inmunitarias, lo que convierte a PIK3R2 en un nodo relevante para desentrañar el cableado y la retroalimentación de la vía. En entornos de investigación, la perturbación de PIK3R2 permite estudios mecanísticos sobre el uso de isoformas de PI3K, la amplitud/terminación de la señal y la comunicación cruzada de la vía con los complejos MAPK y mTOR.

PI 3-kinase p85β El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PIK3R2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PIK3R2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PIK3R2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PIK3R2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.