Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Phox2b Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401351
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Phox2b El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Phox2b, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Phox2b Anticuerpo (B-11): sc-376997
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Phox2b Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401351 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PHOX2B codifica Phox2b, un factor de transcripción homeobox tipo paired que coordina el desarrollo del sistema nervioso autónomo y la diferenciación de neuronas noradrenérgicas al controlar programas de expresión génica durante la pauta (patterning) de la cresta neural y el rombencéfalo. Phox2b regula redes transcripcionales implicadas en la biosíntesis de catecolaminas, la especificación neuronal y la maduración, e interactúa con vías que determinan decisiones de destino en progenitores neurales y el compromiso de linaje en el sistema nervioso periférico. La alteración de la función de PHOX2B se asocia estrechamente con neurocristopatías, incluido el síndrome de hipoventilación central congénita, y con tumores del desarrollo de origen en la cresta neural como el neuroblastoma, lo que refleja su papel en el establecimiento y mantenimiento de la identidad neuronal autonómica. Como regulador definitorio de linaje, PHOX2B constituye un nodo útil para estudiar el control transcripcional del neurodesarrollo y los mecanismos de estabilidad del estado celular y de reprogramación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Phox2b (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PHOX2B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PHOX2B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PHOX2B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Phox2b.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PHOX2B para la investigación de la señalización de Phox2b, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PHOX2B críticos para la función de Phox2b
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PHOX2B para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Phox2b CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Phox2b CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PHOX2B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Phox2b (h) y el plásmido HDR Phox2b (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PHOX2B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PHOX2B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.