Plasmide Double Nickase (h) PGDH: sc-402622-NIC

Le gène humain **HPGD** code la 15‑hydroxyprostaglandine déshydrogénase (PGDH), une oxydoréductase clé dépendante du NAD+ qui catalyse la première étape, limitante, de l’inactivation des prostaglandines et d’autres eicosanoïdes. En convertissant des prostaglandines bioactives telles que la PGE2 en métabolites 15‑céto moins actifs, la PGDH contribue à freiner la signalisation inflammatoire, à moduler le tonus vasculaire et à maintenir l’homéostasie épithéliale dans le cadre du métabolisme de l’acide arachidonique. Une activité altérée de HPGD peut décaler les voies dépendantes des prostaglandines qui influencent les réseaux de cytokines, le dialogue stroma‑épithélium et le remodelage tissulaire. Le dérèglement de cet axe est fréquemment étudié notamment dans l’inflammation chronique et la biologie des cancers, où le renouvellement des prostaglandines impacte la prolifération et la migration cellulaires, ainsi que la signalisation du microenvironnement.

PGDH Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HPGD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HPGD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HPGD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HPGD.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.