PFKL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402662

Übersicht

PFKL kodiert die leberspezifische Isoform der Phosphofructokinase-1 (PFK-1), eines zentralen geschwindigkeitsbestimmenden Enzyms, das in der Glykolyse die Umwandlung von Fructose-6-phosphat zu Fructose-1,6-bisphosphat katalysiert. Durch die Integration allosterischer Signale aus dem zellulären Energie- und Metabolitenstatus hilft PFKL, den glykolytischen Fluss mit biosynthetischem Bedarf und dem Redoxgleichgewicht abzustimmen. Veränderte PFKL-Aktivität und -Expression wurden mit metabolischer Reprogrammierung in proliferativen Zuständen in Verbindung gebracht und tragen zu Veränderungen der Glukoseverwertung, der Laktatproduktion und der nachgeschalteten Kohlenstofflenkung bei. Als zentraler Knotenpunkt der Glykolyse wird PFKL häufig in Studien zur Energiehomöostase, Stressanpassung und zu krankheitsrelevanten metabolischen Abhängigkeiten untersucht.

Das PFKL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PFKL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PFKL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PFKL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PFKL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PFKL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PFKL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PFKL-Exone abzielen, die für die PFKL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PFKL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PFKL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PFKL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PFKL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PFKL HDR-Plasmid (h) und PFKL HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PFKL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PFKL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.