Plasmide CRISPR d'Activation (h) PFKFB4: sc-410933-ACT

Le gène humain **PFKFB4** code la **6‑phosphofructo‑2‑kinase/fructose‑2,6‑bisphosphatase 4**, une enzyme bifonctionnelle qui contrôle les niveaux cellulaires de **fructose‑2,6‑bisphosphate** et ajuste ainsi le flux glycolytique via la régulation allostérique de **PFK1**. En modulant la répartition du carbone entre la glycolyse et les voies métaboliques associées, PFKFB4 contribue à l’adaptation métabolique en conditions de stress telles que l’hypoxie et la limitation en nutriments, avec des effets en aval sur l’équilibre redox et la capacité biosynthétique. Des altérations de l’expression et de l’activité de PFKFB4 ont été associées à la reprogrammation métabolique observée dans divers contextes pertinents pour les maladies, en particulier dans des modèles de signalisation proliférative et de stress du microenvironnement. Par conséquent, PFKFB4 est fréquemment étudiée dans les voies reliant la glycolyse, les réponses régulées par **HIF** et le contrôle de la croissance.

PFKFB4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PFKFB4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PFKFB4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PFKFB4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PFKFB4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PFKFB4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PFKFB4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PFKFB4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PFKFB4 dans les cellules tumorales présentant une expression de PFKFB4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.