Peroxin 14 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405075-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Peroxin 14O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Peroxin 14 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Peroxin 14 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PEX14. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Peroxin 14 Anticorpo (1G12): sc-293383
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Peroxin 14 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405075-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Peroxin 14 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405075-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O PEX14 codifica a peroxina 14, um componente integral da membrana peroxissomal que atua como fator de ancoragem para os complexos receptores PEX5 e PEX7 durante a importação de enzimas da matriz que carregam os sinais de direcionamento PTS1 e PTS2. Por meio desse papel, o PEX14 é central para a biogênese dos peroxissomos, para a manutenção da proteostase da organela e para vias metabólicas, incluindo a β-oxidação de ácidos graxos de cadeia muito longa e a homeostase redox celular. Alterações na importação dependente de PEX14 desorganizam o metabolismo peroxissomal e podem, secundariamente, afetar a função mitocondrial, a sinalização lipídica e o manejo de espécies reativas de oxigênio. A desregulação da montagem dos peroxissomos e da maquinaria de importação está implicada em distúrbios de biogênese peroxissomal e em mecanismos mais amplos relevantes para o neurodesenvolvimento e a disfunção metabólica.
Peroxin 14 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PEX14 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PEX14. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PEX14. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PEX14 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.