Partículas Lentivirales de Activación (h) Perlecan: sc-400823-LAC

HSPG2 codifica perlecano, un gran proteoglicano de heparán sulfato de las membranas basales y de las matrices pericelulares que organiza la arquitectura de la matriz extracelular y regula la adhesión célula–matriz. Mediante su unión a factores de crecimiento como FGF2, VEGF y PDGF, el perlecano modula redes de señalización que incluyen las vías FGF/FGFR, VEGF y rutas dependientes de integrinas, las cuales influyen en la proliferación, la migración y la angiogénesis. El perlecano también contribuye a la mecanotransducción y a la función de barrera de filtración en tejidos como el cartílago, el sistema vascular y los glomérulos renales. La expresión alterada de HSPG2 o cambios estructurales del perlecano se asocian con la desregulación de la matriz extracelular observada en enfermedad vascular, displasias esqueléticas y la remodelación del microambiente tumoral, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudios de biología de la matriz.

Las partículas de activación lentiviral Perlecan (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HSPG2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Perlecan (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HSPG2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Perlecan. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HSPG2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.