Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO PEPT1 (h): sc-401259
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PEPT1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PEPT1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PEPT1 Antibody (E-3): sc-373742
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PEPT1 (h) | sc-401259 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
SLC15A1 code pour PEPT1, un transporteur apical d’oligopeptides couplé aux protons, qui assure l’absorption des di- et tripeptides alimentaires ainsi que d’un large éventail de substrats de type peptidique à travers les barrières épithéliales. L’activité de PEPT1 couple les gradients transmembranaires de H+ à l’absorption des nutriments, reliant le transport intestinal à la disponibilité cellulaire en acides aminés et aux processus métaboliques et de réponse au stress en aval. Son expression est maximale dans l’intestin grêle et peut être induite dans d’autres épithéliums lors de perturbations inflammatoires ou métaboliques, influençant le flux de substrats dans les tissus barrières. Une dérégulation de la fonction SLC15A1/PEPT1 a été étudiée dans des contextes tels que l’inflammation intestinale, des phénotypes de malabsorption et une modification du devenir de composés mimant les peptides, pertinents pour la recherche en pharmacologie et en toxicologie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PEPT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC15A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC15A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC15A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PEPT1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC15A1 pour l'étude de la signalisation de PEPT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de SLC15A1 essentiels à la fonction de PEPT1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC15A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PEPT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PEPT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC15A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PEPT1 plasmide HDR (h) et le PEPT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC15A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC15A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.