Plásmido Doble Nickase (m) Peg1: sc-421634-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Peg1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Peg1 (m) y el plásmido de doble nickasa Peg1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Mest. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Peg1 | sc-421634-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Mest, también conocido como Peg1, es un gen improntado que codifica una proteína asociada a la membrana, implicada en el desarrollo embrionario y placentario, la diferenciación de adipocitos y la regulación del crecimiento. La actividad de Peg1/MEST se ha vinculado a mecanismos de control epigenético, incluida la expresión específica según el progenitor de origen y la metilación del ADN en regiones de control de la impronta, que influyen en los programas de transcripción durante el desarrollo. La alteración de la expresión de Mest/MEST o de su estado de impronta se asocia con crecimiento fetal anómalo, insuficiencia placentaria y fenotipos metabólicos como cambios en la adiposidad. En biología del cáncer, se ha descrito la desregulación de MEST como una característica de la reprogramación epigenética asociada a tumores, por lo que es relevante para estudios sobre impronta, vías del desarrollo y transiciones de estado celular.
Peg1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Mest en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Mest. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Mest. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Mest alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.