Plásmido Doble Nickase (h) PDK4: sc-401355-NIC

PDK4 codifica la piruvato deshidrogenasa quinasa 4, una enzima mitocondrial que fosforila e inhibe el complejo piruvato deshidrogenasa, reduciendo así la conversión de piruvato en acetil‑CoA y desplazando el flujo de carbono desde la oxidación de glucosa hacia el uso de ácidos grasos. Su expresión está regulada por el estado nutricional y por hormonas, e integra señales de vías como la señalización de PPAR, el control transcripcional mediado por insulina/FOXO y los mecanismos de detección del estado energético celular que modulan el metabolismo mitocondrial. La actividad alterada de PDK4 se asocia con la remodelación metabólica y el cambio de sustrato mitocondrial observados en contextos como la resistencia a la insulina, la obesidad, la diabetes tipo 2 y el estrés metabólico cardíaco. Dado que PDK4 influye en la entrada a la fosforilación oxidativa y en la disponibilidad de acetil‑CoA, se estudia con frecuencia en modelos de adaptación metabólica, estrés oxidativo y reprogramación del metabolismo energético vinculada a la inflamación.

PDK4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PDK4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PDK4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PDK4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PDK4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.