Plasmide Double Nickase (m) PDGF Receptor beta/PDGFRB: sc-422171-NIC

Le gène murin **Pdgfrb** code le récepteur bêta du facteur de croissance dérivé des plaquettes (**PDGFRB**), une tyrosine kinase membranaire qui régule la prolifération, la migration et la survie des péricytes et des cellules musculaires lisses vasculaires lors de la maturation des vaisseaux et du remodelage tissulaire. Après liaison d’un ligand PDGF, PDGFRB active les cascades de signalisation canoniques **PI3K–AKT**, **RAS–MAPK** et **PLCγ**, et coordonne la dynamique du cytosquelette ainsi que les interactions avec la matrice extracellulaire via des protéines adaptatrices en aval. Dans la vascularisation en développement comme chez l’adulte, la signalisation médiée par PDGFRB contribue à l’intégrité de la barrière hémato-encéphalique, à la réparation des plaies et au dialogue entre le stroma et le système immunitaire. Une activité PDGFRB dérégulée est fréquemment utilisée comme lecture moléculaire dans des études d’angiogenèse, de fibrose, de remodelage inflammatoire et de biologie du stroma associé aux tumeurs dans des modèles murins.

PDGF Receptor beta/PDGFRB Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pdgfrb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pdgfrb. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pdgfrb. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pdgfrb.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.