PDGF-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400586

Visão geral

PDGFB codifica a subunidade B do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF-B), um mitógeno secretado que forma dímeros ativos de PDGF e sinaliza principalmente por meio de tirosina-quinases do receptor de PDGF para regular o recrutamento de pericitos, a maturação vascular e a proliferação de células mesenquimais. A sinalização impulsionada por PDGF-B envolve as vias MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ, moldando a remodelação do citoesqueleto, a quimiotaxia e a deposição de matriz extracelular nos compartimentos estromal e vascular. A desregulação da expressão de PDGFB ou a ativação do eixo PDGF está implicada na angiogênese patológica, no remodelamento fibrótico e em circuitos de crescimento autócrinos ou parácrinos dependentes de PDGF observados em diversos microambientes tumorais. Como resultado, o PDGFB é amplamente estudado na comunicação entre endotélio e pericitos, na biologia do reparo de feridas e em redes de sinalização estromal relevantes para o remodelamento tecidual e a biologia do câncer.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PDGF-B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PDGFB em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PDGFB, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PDGFB na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PDGF-B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PDGFB para a investigação da sinalização de PDGF-B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PDGFB críticos para a função PDGF-B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PDGFB para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PDGF-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PDGF-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PDGFB. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PDGF-B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PDGF-B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PDGFB para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PDGFB definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.