Plasmide CRISPR d'Activation (h) PDE7B: sc-411961-ACT

Le gène humain PDE7B code la phosphodiestérase 7B, une phosphodiestérase spécifique de l’AMPc qui hydrolyse l’AMP cyclique en 5′-AMP et module ainsi l’amplitude et la durée de la signalisation intracellulaire dépendante de l’AMPc. En contrôlant des voies dépendantes de l’AMPc, telles que la transcription médiée par PKA/CREB et la modulation en aval des programmes de signalisation immunitaires et neuronaux, PDE7B contribue à la régulation de l’activation, de la différenciation et de la survie cellulaires. L’expression et l’activité de PDE7B ont été associées à des réseaux de signalisation inflammatoire et à des processus pertinents en neurobiologie, ce qui en fait un point d’entrée utile pour étudier la compartimentation de l’AMPc et l’intégration des signaux. Une dérégulation de la signalisation associée à PDE7B a été rapportée dans des contextes liés à des dysfonctionnements immunitaires et à des phénotypes du SNC, ce qui soutient l’étude de cette voie comme modulateur dans des modèles de maladie.

PDE7B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PDE7B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PDE7B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PDE7B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PDE7B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PDE7B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PDE7B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PDE7B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PDE7B dans les cellules tumorales présentant une expression de PDE7B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.