Partículas Lentivirales de Activación (h) PCTAIRE-3: sc-404867-LAC

CDK18 codifica la quinasa de serina/treonina PCTAIRE-3, un miembro de la familia de quinasas dependientes de ciclina implicado en la regulación de la progresión del ciclo celular y de la señalización dependiente de fosforilación en células proliferativas. La actividad de CDK18 se ha relacionado con el mantenimiento del genoma y con redes de respuesta al daño del ADN, incluidos procesos que influyen en el estrés replicativo y el control de puntos de control (checkpoints). La expresión o función alteradas de CDK18 se han asociado con fenotipos de proliferación aberrantes y se han estudiado en el contexto de la biología del cáncer y otros trastornos en los que las vías del ciclo celular y de reparación están desreguladas. Como modulador de circuitos impulsados por quinasas, CDK18 ofrece un punto de intervención útil para investigar la interacción entre la regulación por ciclina/CDK, la señalización de estrés y los programas transcripcionales.

Las partículas de activación lentiviral PCTAIRE-3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CDK18 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PCTAIRE-3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CDK18, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PCTAIRE-3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CDK18 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.