PCTAIRE-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404867-ACT

CDK18 kodiert die Serin/Threonin-Kinase PCTAIRE-3, ein Mitglied der Familie der cyclinabhängigen Kinasen, das an der Regulation zellzyklusgekoppelter Signal- und Phosphorylierungsnetzwerke beteiligt ist. PCTAIRE-3 wird mit der Kontrolle der Zellproliferation und stressantwortlichen Signalwegen in Verbindung gebracht; seine Aktivität gilt als in Kinasekaskaden eingebunden, die Transkriptionsprogramme und die zelluläre Homöostase beeinflussen. Eine dysregulierte CDK18-Expression oder -Signalgebung wurde in Studien zu proliferativen Erkrankungen und zur Tumorbiologie beschrieben, was seine Eignung als Forschungsziel zur Untersuchung von Mechanismen der Wachstumskontrolle und Genomstabilität untermauert. Eine experimentelle Modulation der CDK18-Spiegel kann daher zur Kartierung von Signalwegen in Kontexten der Zellzyklusregulation und onkogener Signalgebung beitragen.

PCTAIRE-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDK18-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PCTAIRE-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDK18-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDK18-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PCTAIRE-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDK18-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PCTAIRE-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PCTAIRE-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDK18-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.