PCPE-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411925

Descripción general

PCOLCE2 codifica la proteína potenciadora 2 de la procollágeno C-endopeptidasa (PCPE-2), una glucoproteína asociada a la matriz extracelular que potencia el procesamiento de los propéptidos C del procollágeno mediado por BMP1/proteinasas tipo tolloide, promoviendo así la fibrilogénesis del colágeno y la maduración de la matriz. Al modular el depósito y el recambio de colágeno, PCPE-2 contribuye a programas de remodelación tisular vinculados a la activación de fibroblastos, la reparación de heridas y la regulación de la mecánica del estroma. La alteración de la expresión de PCOLCE2 o de la actividad de PCPE-2 se ha implicado en la remodelación fibrótica y en otras patologías caracterizadas por una organización desregulada de la matriz extracelular. En sistemas humanos, PCPE-2 es por tanto un nodo útil para investigar las vías de biosíntesis del colágeno y la comunicación cruzada de la señalización impulsada por la matriz.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PCPE-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PCOLCE2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PCOLCE2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PCOLCE2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PCPE-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PCOLCE2 para la investigación de la señalización de PCPE-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PCOLCE2 críticos para la función de PCPE-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PCOLCE2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PCPE-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PCPE-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PCOLCE2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PCPE-2 (h) y el plásmido HDR PCPE-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PCOLCE2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PCOLCE2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.