PCMT1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418153

Visão geral

PCMT1 codifica a proteína O-metiltransferase 1 de L-isoaspartato (D-aspartato), uma metiltransferase dependente de SAM que repara danos isoaspartil em proteínas induzidos pelo envelhecimento ou pelo estresse, metilando resíduos anômalos de Asp/Asn para facilitar a reconversão para ligações normais. Essa atividade de controle de qualidade proteica sustenta a proteostase e limita o acúmulo de proteínas disfuncionais e propensas à agregação, ligando PCMT1 às respostas celulares ao estresse oxidativo e à manutenção de proteínas de vida longa no citosol e no núcleo. A função de PCMT1 se cruza com vias que governam a renovação/degradação de proteínas, redes de chaperonas e resiliência ao estresse, o que a torna relevante para estudos sobre envelhecimento de proteínas e danos pós-traducionais. Alterações na atividade de PCMT1 têm sido investigadas em contextos de neurobiologia e outros distúrbios nos quais o dano proteico e mecanismos de reparo comprometidos contribuem para a disfunção celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PCMT1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PCMT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PCMT1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PCMT1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PCMT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PCMT1 para a investigação da sinalização de PCMT1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PCMT1 críticos para a função PCMT1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PCMT1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PCMT1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PCMT1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PCMT1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PCMT1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PCMT1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PCMT1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PCMT1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.