PCMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418153

Übersicht

PCMT1 kodiert die Protein-L-Isoaspartat-(D-Aspartat)-O-Methyltransferase 1, eine SAM-abhängige Methyltransferase, die alters- oder stressbedingte Isoaspartyl-Schäden in Proteinen repariert, indem sie abnorme Asp-/Asn-Reste methyliert und so deren Rückumwandlung in normale Bindungen erleichtert. Diese qualitätskontrollierende Proteinaktivität unterstützt die Proteostase und begrenzt die Anreicherung dysfunktionaler, aggregationsanfälliger Proteine, wodurch PCMT1 mit zellulären Antworten auf oxidativen Stress sowie der Aufrechterhaltung langlebiger Proteine im Zytosol und Zellkern verknüpft ist. Die Funktion von PCMT1 überschneidet sich mit Signalwegen, die Proteinumsatz, Chaperon-Netzwerke und Stressresilienz steuern, und ist damit relevant für Studien zu Proteinaging und posttranslationalen Schäden. Veränderte PCMT1-Aktivität wurde in neurobiologischen Zusammenhängen und weiteren Erkrankungen untersucht, bei denen Proteinschäden und beeinträchtigte Reparaturmechanismen zur zellulären Dysfunktion beitragen.

Das PCMT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PCMT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PCMT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PCMT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PCMT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PCMT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PCMT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PCMT1-Exone abzielen, die für die PCMT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PCMT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PCMT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PCMT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PCMT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PCMT1 HDR-Plasmid (h) und PCMT1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PCMT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PCMT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.