Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO PCCB (m): sc-426258
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PCCB Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PCCB, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PCCB Antibody (F-6): sc-515740
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PCCB (m) | sc-426258 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Pccb** code la sous-unité bêta de la propionyl‑CoA carboxylase (PCCB), une enzyme mitochondriale biotine‑dépendante qui catalyse la conversion du propionyl‑CoA en méthylmalonyl‑CoA. Cette réaction relie le catabolisme des acides aminés à chaîne ramifiée (valine, isoleucine), des acides gras à nombre impair de carbones et de la chaîne latérale du cholestérol à un apport anaplérotique dans le cycle de l’AC T via le succinyl‑CoA. La fonction de PCCB soutient le métabolisme mitochondrial et l’homéostasie énergétique cellulaire en empêchant l’accumulation de métabolites dérivés du propionyl‑CoA. Une altération de l’activité de la propionyl‑CoA carboxylase est associée à la physiopathologie de l’acidémie propionique, ce qui fait de **Pccb** un locus utile pour étudier les réponses au stress métabolique et l’adaptation des voies mitochondriales dans des modèles murins.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PCCB (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pccb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pccb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pccb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PCCB.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pccb pour l'étude de la signalisation de PCCB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Pccb essentiels à la fonction de PCCB
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pccb pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PCCB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PCCB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pccb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PCCB plasmide HDR (m) et le PCCB (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pccb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pccb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.