PCCB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426258

Descripción general

El gen **Pccb** de ratón codifica la subunidad beta de la propionil‑CoA carboxilasa (PCCB), una enzima mitocondrial dependiente de biotina que cataliza la conversión de propionil‑CoA en metilmalonil‑CoA. Esta reacción conecta el catabolismo de los aminoácidos de cadena ramificada (valina, isoleucina), de los ácidos grasos de cadena impar y de la cadena lateral del colesterol con el aporte anaplerótico al ciclo del TCA a través del succinil‑CoA. La función de PCCB sustenta el metabolismo mitocondrial y la homeostasis energética celular al prevenir la acumulación de metabolitos derivados del propionil‑CoA. La alteración de la actividad de la propionil‑CoA carboxilasa se asocia con la biología de la acidemia propiónica, lo que convierte a **Pccb** en un locus útil para estudiar las respuestas al estrés metabólico y la adaptación de las vías mitocondriales en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PCCB (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pccb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pccb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pccb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PCCB.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pccb para la investigación de la señalización de PCCB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pccb críticos para la función de PCCB
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pccb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PCCB CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PCCB CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pccb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PCCB (m) y el plásmido HDR PCCB (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pccb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pccb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.