Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO PCB (h): sc-401254
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PCB Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PCB, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PCB Antibody (D-9): sc-365673
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PCB (h) | sc-401254 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
La PC humaine (pyruvate carboxylase) code une enzyme mitochondriale biotine‑dépendante qui catalyse la carboxylation du pyruvate en oxaloacétate, réaction couplée à l’ATP, permettant de reconstituer les intermédiaires du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs, TCA) et de soutenir l’anaplérose. L’activité de PC relie le métabolisme central du carbone à la néoglucogenèse, à la lipogenèse et à la biosynthèse des acides aminés, en influençant l’équilibre rédox mitochondrial et l’homéostasie énergétique cellulaire. Des altérations de l’expression ou de la fonction de PC ont été associées à des erreurs innées du métabolisme ainsi qu’à la reprogrammation métabolique observée dans plusieurs contextes pathologiques, notamment le cancer et les atteintes hépatiques, où le flux anaplérotique peut affecter la prolifération et les réponses au stress.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PCB (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PCB.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PC pour l'étude de la signalisation de PCB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PC essentiels à la fonction de PCB
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PC pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PCB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PCB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PCB plasmide HDR (h) et le PCB (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.