PCAF CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400753-ACT

KAT2B kodiert PCAF, eine Histon-Acetyltransferase der GNAT-Familie, die Histone und Nicht-Histon-Substrate acetyliert, um die Chromatinzugänglichkeit und den transkriptionellen Output zu modulieren. PCAF wirkt in multiproteinären Koaktivator-Komplexen und interagiert mit Transkriptionsfaktoren, um Prozesse wie Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten und Differenzierungsprogramme zu regulieren. Über die acetylierungsabhängige Kontrolle der Genexpression trägt KAT2B/PCAF zu Signalwegen bei, die mit inflammatorischer Signalübertragung und onkogenen transkriptionellen Netzwerken verknüpft sind. Eine dysregulierte PCAF-Aktivität oder -Expression wurde mit veränderten epigenetischen Zuständen in verschiedenen Krebskontexten sowie weiteren Erkrankungen in Zusammenhang gebracht, die mit einem Ungleichgewicht der Transkription einhergehen.

PCAF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KAT2B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PCAF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KAT2B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KAT2B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PCAF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KAT2B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PCAF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PCAF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KAT2B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.