PBR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419383

Übersicht

Das murine Gen **Tspo** kodiert den peripheren Benzodiazepinrezeptor (PBR), ein 18-kDa-Protein, das überwiegend in der äußeren Mitochondrienmembran lokalisiert ist, Cholesterin und Porphyrine bindet und die mitochondriale Homöostase unterstützt. PBR ist an Cholesterintransport und steroidogenem Stoffwechsel beteiligt, reguliert die mitochondriale Permeabilität und apoptoseassoziierte Signalwege und beeinflusst das Gleichgewicht reaktiver Sauerstoffspezies sowie Entzündungsreaktionen. Die Expression von Tspo/PBR ist in aktivierter Mikroglia und peripheren Immunzellen angereichert und wird breit als Marker für Neuroinflammation verwendet; darüber hinaus ist es relevant im Zusammenhang mit mitochondrialer Dysfunktion, wie sie bei neurodegenerativen Erkrankungen und unter metabolischem Stress beobachtet wird. Diese Funktionen machen Tspo zu einem nützlichen Knotenpunkt, um mitochondriengekoppelte Signalnetzwerke zu analysieren, die zellulären Stress mit Immunaktivierung und Gewebeumbau verknüpfen.

Das PBR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tspo-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tspo-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tspo nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PBR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tspo-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PBR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tspo-Exone abzielen, die für die PBR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tspo-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PBR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PBR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tspo-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PBR HDR-Plasmid (m) und PBR HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tspo-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tspo-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.