Plasmide CRISPR d'Activation (h) PBR: sc-401624-ACT

La protéine translocatrice TSPO, également connue sous le nom de récepteur périphérique des benzodiazépines (PBR), est une protéine de la membrane externe mitochondriale impliquée dans le transport du cholestérol, la stéroïdogenèse et la régulation de la bioénergétique mitochondriale. TSPO influence l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène, la transition de perméabilité mitochondriale et la signalisation apoptotique, ce qui la relie aux réponses cellulaires au stress et aux programmes inflammatoires. Dans les cellules immunitaires et gliales, l’expression de TSPO est corrélée à l’état d’activation et au remodelage mitochondrial, ce qui en fait un marqueur moléculaire largement utilisé dans la recherche sur la neuroinflammation. Une activité ou une expression dérégulée de TSPO/PBR a été associée à une altération de la fonction mitochondriale dans les troubles neurologiques, à la reprogrammation métabolique liée au cancer et à des pathologies inflammatoires, ce qui soutient des études mécanistiques de la signalisation mitochondriale et du destin cellulaire.

PBR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TSPO sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PBR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TSPO dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TSPO, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PBR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TSPO natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PBR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PBR dans les cellules tumorales présentant une expression de TSPO silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.