Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) PB1: sc-403988-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PB1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PB1 Double Nickase (h) et le plasmide PB1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PBRM1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PB1 Antibody (D-8): sc-390095
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PB1 | sc-403988-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PB1 | sc-403988-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PBRM1 code polybromo-1 (PB1), une sous-unité emblématique du complexe de remodelage de la chromatine PBAF (SWI/SNF) dépendant de l’ATP, qui régule le positionnement des nucléosomes et l’accessibilité de la chromatine. Grâce à ses bromodomaines, PB1 contribue à interpréter l’acétylation des histones et à coordonner des programmes transcriptionnels liés au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la différenciation spécifique des lignages. L’activité de PBRM1 s’articule avec la régulation épigénétique, la fonction des enhancers et les voies de stabilité du génome qui façonnent l’identité cellulaire. La perturbation ou la régulation altérée de PBRM1 est fréquemment étudiée dans le contexte de défauts de remodelage de la chromatine associés à la biologie des suppresseurs de tumeurs et à une dérégulation transcriptionnelle.
PB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PBRM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PBRM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PBRM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PBRM1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.