Pax-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422122-ACT

O gene murino Pax9 codifica o fator de transcrição Pax-9 da família paired box, um regulador nuclear que se liga ao DNA e é necessário para a padronização e a organogênese, com papéis de destaque na morfogênese craniofacial, na odontogênese e em tecidos derivados das bolsas faríngeas. O Pax-9 influencia redes regulatórias de genes do desenvolvimento ao coordenar programas transcricionais que se cruzam com a sinalização epitélio–mesenquimal e com vias envolvidas na especificação e diferenciação tecidual, incluindo processos associados a Wnt e BMP. A expressão ou função desregulada de Pax9 tem sido associada a anomalias congênitas do desenvolvimento, sobretudo agenesia dentária e defeitos craniofaciais, o que o torna um locus útil para estudar dose gênica, lógica de enhancers e comprometimento de linhagem em sistemas de mamíferos.

Pax-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pax9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pax-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pax9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pax9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pax-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pax9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pax-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pax-9 em células tumorais com expressão de Pax9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.