Pax-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403899-ACT

PAX9 codifica o fator de transcrição Pax-9, da família paired box, um regulador nuclear de ligação ao DNA necessário para o padrão embrionário e a organogênese, particularmente no desenvolvimento craniofacial, dentário, do timo e das paratireoides. O Pax-9 modula programas de especificação de linhagem ao coordenar redes transcricionais com outros reguladores do desenvolvimento, influenciando o estado da cromatina e a expressão de genes de diferenciação a jusante. Alterações na dosagem ou na função de PAX9 têm sido associadas à agenesia dentária congênita e a outras anomalias do desenvolvimento craniofacial, tornando-o um nó relevante para o estudo da morfogênese e do controle do destino celular. Em contextos adultos e de doença, a expressão desregulada de PAX9 é investigada como marcador e modulador de estados de diferenciação epitelial e de reprogramação transcricional.

Pax-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAX9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pax-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAX9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAX9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pax-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAX9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pax-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pax-9 em células tumorais com expressão de PAX9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.