Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Pax-7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422120
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Pax-7 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Pax-7, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Pax-7 Anticuerpo (PAX7): sc-81648
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Pax-7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422120 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Pax7 codifica Pax-7, un factor de transcripción con dominio paired box que define y mantiene las células satélite del músculo esquelético y coordina el compromiso del linaje miogénico durante el desarrollo y la regeneración. Pax-7 regula programas de expresión génica que controlan la autorrenovación, la supervivencia y la diferenciación de los progenitores, y se integra con redes de señalización como Notch y Wnt que ajustan la quiescencia y la activación de las células madre. En modelos murinos, la alteración de la función de Pax-7 perturba la dinámica de la reparación muscular y la homeostasis del reservorio de células satélite, lo que respalda su relevancia para estudiar los mecanismos subyacentes a la atrofia muscular, la regeneración deficiente y las miopatías del desarrollo. Pax-7 también se utiliza como marcador y regulador en biología neuromuscular y en estudios del destino celular, donde el control transcripcional de la miogénesis es un objetivo clave.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pax-7 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pax7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pax7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pax7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pax-7.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pax7 para la investigación de la señalización de Pax-7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Pax7 críticos para la función de Pax-7
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pax7 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Pax-7 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Pax-7 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pax7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pax-7 (m) y el plásmido HDR Pax-7 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pax7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pax7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.