patched 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404866

Übersicht

PTCH2 kodiert Patched 2, einen zwölffach die Membran durchspannenden Rezeptor, der als zentraler negativer Regulator der Hedgehog-Signalübertragung wirkt, indem er Hedgehog-Liganden bindet und die Aktivität von Smoothened moduliert. Über die Kontrolle der GLI-abhängigen Transkription trägt PTCH2 zur Musterbildung während der Entwicklung, zu Zellschicksalsentscheidungen und zur Gewebehomöostase bei; seine Aktivität überschneidet sich dabei mit Prozessen wie Proliferation, Differenzierung und Ziliogenese. Eine fehlregulierte Hedgehog-Signalgebung und veränderte PTCH2-Funktion wurden mit onkogenen Signal-Kontexten sowie angeborenen bzw. entwicklungsbedingten Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische, signalwegspezifische Studien unterstreicht. PTCH2 wird zudem im Zusammenhang mit Rezeptortransport (Trafficking) und Feedback-Regulation untersucht, die Signalstärke und -dauer feinabstimmen.

Das patched 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PTCH2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PTCH2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PTCH2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die patched 2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PTCH2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der patched 2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PTCH2-Exone abzielen, die für die patched 2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PTCH2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom patched 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom patched 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PTCH2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das patched 2 HDR-Plasmid (h) und patched 2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PTCH2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PTCH2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.