Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PARP1 Double Nickase Plasmid (m): sc-419018-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PARP1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PARP1 Double-Nickase-Plasmid (m) und PARP1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Parp1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PARP1: sc-74470
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PARP1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419018-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PARP1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419018-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Parp1* kodiert die Poly(ADP-Ribose)-Polymerase 1 (PARP1), einen chromatinassoziierten DNA-Schadenssensor, der als Reaktion auf Einzel- und Doppelstrangbrüche die PARylierung von sich selbst und anderen nukleären Proteinen katalysiert. PARP1 koordiniert die Basenexzisionsreparatur und die Reparatur von Einzelstrangbrüchen und beeinflusst die Stabilität von Replikationsgabeln durch die Rekrutierung von DNA-Reparaturfaktoren sowie durch Umbauten der Chromatinstruktur. Über die Genomwartung hinaus moduliert PARP1 Transkriptionsprogramme und inflammatorische Signalwege, einschließlich Crosstalk mit NF-κB- und Stressantwort-Signalwegen. Eine dysregulierte PARP1-Aktivität oder eine veränderte *Parp1*-Expression wird mit genomischer Instabilität in Verbindung gebracht und häufig in Zusammenhängen wie Krebsbiologie, Neurodegeneration und ischämiebedingten Gewebeschäden in Mausmodellen untersucht.
PARP1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Parp1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Parp1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Parp1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Parp1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.