PARP-7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407777-ACT

Humanes TIPARP kodiert PARP-7 (TCDD‑induzierbare Poly(ADP‑Ribose)-Polymerase), eine Mono‑ADP‑Ribosyltransferase, die Proteinsubstrate modifiziert, um Signaltransduktion, Transkriptionsprogramme und Proteinstabilität zu regulieren. PARP‑7 wird nachgeschaltet der Aryl‑Kohlenwasserstoffrezeptor-(AHR)-Signalgebung induziert und ist an der Rückkopplungskontrolle von Xenobiotika‑Antwortwegen beteiligt, wodurch es die zelluläre Anpassung an Umweltliganden mitprägt. Über eine ADP‑Ribosylierungs‑abhängige Modulation regulatorischer Proteine beeinflusst TIPARP stressresponsive Genexpressionsnetzwerke und immunbezogene Prozesse. Eine veränderte TIPARP/PARP‑7‑Aktivität wurde mit fehlregulierter inflammatorischer Signalgebung und krebsrelevanten Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, was mechanistische Untersuchungen von Crosstalk zwischen Signalwegen unterstützt.

PARP-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TIPARP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PARP-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TIPARP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TIPARP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PARP-7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TIPARP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PARP-7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PARP-7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TIPARP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.