Plásmido CRISPR de Activación (h) PARG: sc-404382-ACT

La glicohidrolasa de poli(ADP-ribosa) (PARG) es la principal enzima responsable de hidrolizar las cadenas de poli(ADP-ribosa) (PAR) sintetizadas por los miembros de la familia PARP, terminando así la señalización de la PARilación y restaurando la función proteica tras las respuestas al estrés. Al regular el recambio de PAR, PARG ayuda a controlar la detección y reparación del daño en el ADN, la remodelación de la cromatina, la tolerancia al estrés replicativo y vías de muerte celular como la parthanatos mediante la modulación del reclutamiento de proteínas dependiente de PAR. La actividad de PARG se integra con los procesos de reparación por escisión de bases y de reparación de roturas de cadena sencilla, influyendo en la estabilidad del genoma y en programas transcripcionales vinculados a la adaptación celular al estrés. La desregulación del metabolismo de PAR se ha asociado con la biología del cáncer y la neurodegeneración, lo que convierte a PARG en un nodo útil para estudios mecanísticos de la capacidad de reparación del ADN, la dinámica de la cromatina y la señalización inducida por estrés.

PARG El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PARG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PARG El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PARG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PARG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PARG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PARG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PARG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PARG en células tumorales con expresión de PARG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.