PAR-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401719

Übersicht

F2RL3 kodiert den proteaseaktivierten Rezeptor 4 (PAR-4), einen thrombinresponsiven G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der extrazelluläre Proteasesignale in eine intrazelluläre Kalziummobilisierung und Kinasekaskaden überführt. PAR-4 koppelt an die Gq- und G12/13-Signalwege, um die PLCβ-Signalübertragung, eine RhoA-abhängige Zytoskelett-Remodellierung sowie nachgeschaltete MAPK- und NF‑κB-Programme zu regulieren, die den Aktivierungszustand von Zellen prägen. In menschlichen Thrombozyten und gefäßassoziierten Zellen trägt PAR-4 zur hämostatischen und inflammatorischen Signalgebung bei und ist mit gerinnungsgekoppelten Signalwegen vernetzt, die Zelladhäsion und Barriereantworten beeinflussen. Eine veränderte F2RL3/PAR-4-Aktivität wurde in Zusammenhängen wie der thrombosebezogenen Biologie, vaskulären Entzündung und tumor mikroenvironment-assoziierten Signalgebung untersucht, in denen Proteasesignale Proliferation und Motilität modulieren.

Das PAR-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des F2RL3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des F2RL3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von F2RL3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAR-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von F2RL3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAR-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf F2RL3-Exone abzielen, die für die PAR-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere F2RL3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAR-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PAR-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des F2RL3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAR-4 HDR-Plasmid (h) und PAR-4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von F2RL3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten F2RL3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.