PAR-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400333-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PAR-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PAR-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und PAR-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf F2RL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PAR-2: sc-13504
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PAR-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400333-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PAR-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400333-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
F2RL1 kodiert den proteaseaktivierten Rezeptor 2 (PAR-2), einen G‑Protein-gekoppelten Rezeptor, der durch eine serinproteasevermittelte Spaltung aktiviert wird, wodurch ein „tethered ligand“ (ein kovalent gebundener Ligand) freigelegt wird. Die PAR-2-Signalübertragung nutzt Gq/11- und β‑Arrestin-Wege und führt zu intrazellulären Ca²⁺-Flüssen, MAPK/ERK-Aktivierung, NF‑κB‑abhängiger Transkription sowie Zytoskelett-Umbau; dadurch werden inflammatorische Signalwege und Antworten der epithelialen Barriere geprägt. PAR-2 ist an Wechselwirkungen mit Gerinnungs- und Kallikrein-assoziierten Proteasenetzwerken beteiligt und verknüpft extrazelluläre Proteolyse mit Zytokinproduktion und der Rekrutierung von Leukozyten. Eine fehlregulierte PAR-2-Aktivität wurde mit entzündlichen und fibrotischen Prozessen, Schmerz- und Juckreizsignalgebung sowie Interaktionen zwischen Tumor und Mikroumgebung in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie relevant sind.
PAR-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des F2RL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von F2RL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die F2RL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit F2RL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.