PANK2 Double Nickase Plasmid (h): sc-405120-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PANK2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PANK2 Double-Nickase-Plasmid (h) und PANK2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PANK2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PANK2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405120-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PANK2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405120-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Pantothenatkinase 2 (PANK2) ist ein mitochondriales Enzym, das den ersten, geschwindigkeitsbestimmenden Schritt der Biosynthese von Coenzym A (CoA) aus Pantothenat katalysiert und damit die Verfügbarkeit von Vitamin B5 mit der zellulären Acyl‑CoA-Produktion und dem Energiestoffwechsel koppelt. Durch die Regulation der CoA-Pools beeinflusst PANK2 die mitochondriale Funktion, den Lipidstoffwechsel und die Redoxhomöostase, mit nachgelagerten Effekten auf Signal- und Stoffwechselwege wie die β‑Oxidation von Fettsäuren und den Citratzyklus (TCA-Zyklus). Eine Fehlregulation der PANK2-Aktivität oder -Expression ist mit verändertem Stoffwechselfluss und mitochondrialem Stress verbunden; zudem wird PANK2 häufig im Zusammenhang mit Neurodegeneration und Phänotypen der Eisenhomöostase untersucht, einschließlich der pantothenatkinaseassoziierten Neurodegeneration (PKAN). Diese Eigenschaften machen PANK2 zu einem nützlichen Ziel, um die Kontrolle des mitochondrialen Stoffwechsels und stressresponsive Signalgebung in menschlichen Zellsystemen zu untersuchen.
PANK2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PANK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PANK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PANK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PANK2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.